Percoll和普通的淋巴细胞分离液有什么不同
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发布时间：2022-05-16 15:39
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时间：2023-10-28 18:35
Ficoll与Percoll均为密度梯度离心法
①Ficoll-Hypaque密度梯度离心法：人外周血单个核细胞(peripheral blood mononuclear cell,PBMC)包括淋巴细胞和单核细胞，其体积、形状和比重与其他细胞不同，红细胞和多核白细胞比重较大，为1.092左右，而淋巴细胞和单个核细胞比重为1.075左右。利用密度在1.077±0.001g/L之间近于等渗的Ficoll-Hypaque混合溶液(称为淋巴细胞分层液)作密度梯度离心时,各种血液成分将按密度梯度重新分布聚集。血浆和血小板由于密度较低,故悬浮于分层液的上部；红细胞与粒细胞由于密度较大,故沉于分层液的底部；PBMC密度稍低于分层液,故位于分层液界面上,这样就可获得PBMC。
②Percoll密度梯度离心法：Percoll是Pharmacia公司的商品名，成分为硅化聚乙烯吡咯烷酮(PVP)，为无毒，无刺激的新型密度梯度离心分离剂。聚乙烯吡咯酮包被的硅胶混悬液，它具有易成等渗、粘度低、无毒性、不引起细胞聚集等优点，已得到广泛引用。由于Percoll在培养基中颗粒大小不等，其在离心过程中自然形成密度梯度，从而将不同密度的细胞分离出来。将1份10×PBS与9份percoll储存液混合，制成等渗Percoll悬液，此悬液被认为是100 % Percoll悬液，其密度为1.1294g/ml,可通过用PBS(1x)或组织培养液稀释此100%Percoll而获得适宜密度进行细胞分离，因为稀释度与密度线性相关，常用的密度如下：
70% Percoll 1.090g/ml
60% Percoll 1.077g/ml
50% Percoll 1.067g/ml
40% Percoll 1.056g/ml
30% Percoll 1.043g/ml
20% Percoll 1.031g/ml
通过几个由高到低稀释度的叠加,形成与混合细胞的各组分细胞相应比重的梯度,达到可以将不同密度的细胞区分开来.
一句话总结:Ficoll只能分离出密度在1.077±0.001g/L之间的淋巴细胞,PERCOLL能将全血中的多种细胞分离出来,若只分离淋巴细胞,可以用普通淋巴细胞分离液
