发布网友 发布时间:2022-05-16 15:27
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热心网友 时间:2023-10-28 06:31
DNA和RNA作为遗传物质,本身都有自己的特性,用于检测的方法也有很多,如下:
首先我们要知道:
DNA:为双链结构,由A 、C 、G、T组成,链有外显子和内含子区域,物质性质中A260/A280在1.8左右,在260nm出有最大吸收峰。
RNA:正常情况下为单链结构,除了一些病毒等,由A、C、G、U组成,主要有rRNA、tRNA、mRNA组成,rRNA的三个亚基是我们判别RNA是否降解的一个重要参数,A260/A280在1.8-2.0左右,在260nm出有最大吸收峰。
1、抽提试剂盒分别抽提:将产品分成两份,其中一份用来抽提DNA,此样本加入RNA 酶,另一份用来抽提RNA,此样本加入Dnase I,由此抽提出来的核酸进行琼脂糖凝胶电泳或者aligent 4200/2100仪器检测,考虑到DNA和RNA可能会降解,只有样本完好时,才能轻易地辨别出来。
2、qPCR技术:如1中所示,用1中的样本进行qPCR验证,设计引物时DNA样本跨外显子区域,或者是单独设计内含子区,加标准品对照,RNA正常设计即可,由此得出的结果可以根据扩增长度和两个结果进行判定。
以上为两个最基本的方法,操作简单,成本可控,两个结合起来结果准确,当然还有一些其他的方法,并设计对照试验,采用控制变量法进行研究。