PCR琼脂糖凝胶电泳后发现核酸向负极方向反着跑到胶的头部了，怎么回事？

发布网友发布时间：2022-05-13 14:30

共4个回答

热心网友时间：2023-10-12 11:41

这里有个论坛，讨论这事
http://www.protocol-online.org/biology-forums/posts/18605.html
你看看有没有他们提到的任何一种情况？

还有，你做的是PCR，可以看到有未结合的引物在下方，而你在上方的那些条带看起来并不是PCR产物（太长）。PCR产物看起来应该和Marker类似（形状）。建议你换个PCR试剂盒看看。追问好的，我去看看~

热心网友时间：2023-10-12 11:42

这个不是跑反了吧，好像是没有跑出来啊，你看下面很小的地方还有东西呢，你是提的基因组吗?基因组很大，没跑出进样孔很正常啊追问恩，我提的是全基因，是有东西出来呀，只是全往上跑了，图片太小了显示不出来，在第四甬道那里的亮条可以看到吧

热心网友时间：2023-10-12 11:42

marker跑的没问题，说明这不是电泳的事儿，你PCR有阳性对照吗？阳性对照检查你PCR体系是否正常，16S的引物是否新合成的，用其他菌PCR试试，以确定你提取的基因组是否有问题，向上跑的一般是杂质能结合EB并且带正点荷。追问没有阳性的，那菌是未知的，不过这个体系之前有过一次成功过，测序也没问题，只是之后就没成功的了...基因组我后来再用QIAGEN的试剂盒提取过，还是这样...我荧光染料不是用EB的，是用GENE FINDER的

追答你提大肠杆菌的基因组，当阳性对照吧，还用你的16S的那对引物，看看能不能PCR出条带，要是能出带，证明你的基因组可能有问题了，要是不能出带，你就换引物吧

热心网友时间：2023-10-12 11:43

我也觉得那个亮亮的不是DNA，感觉PCR就没P出来，你提完基因组跑没跑过？再有你提的时候菌是不是比较老啊，杂质多的话可能也会影响PCR，还有看看引物单看他们有没有合错~