发布网友 发布时间:2022-05-12 13:30
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热心网友 时间:2023-10-09 16:43
半抗原与载体蛋白的耦联物称之为人工抗原。载体不仅是简单地增加半抗原的分子质量,更重要的是利用其强的免疫原性诱导机体产生免疫应答,对半抗原发生载体效应的作用。蛋白质结构越复杂,免疫原性越好。常用的载体蛋白有牛血清白蛋白(BSA)、卵清蛋白(OVA)、兔血清白蛋白(RSA)、人血清白蛋白(HSA)、人γ球蛋白(γ-GA)、人血纤维蛋白、钥孔血蓝蛋白(KLH)、甲状腺球蛋白(thyroglobulin)、猪血清白蛋白(PSA)等。
半抗原含有的活性基团不同,半抗原与载体蛋白耦联的方法也不同。通常,含羧基的半抗原采用碳二亚胺(EDC)法、混合酸酐(MA)法和Woodward试剂法;含羟基的半抗原采用琥珀酸酐法;含羟基的半抗原采用戊二醛法、一氯醋酸钠法和偶氮苯甲酸法;含酚基的半抗原采用重氮化法;含氨基的半抗原采用Mannich反应、重氮化法和丙烯酸法、二异氰酸酯法、卤代硝基苯法、亚胺酸酯法;含酮基的半抗原采用氨基氧乙酸法;含巯基的半抗原采用SAMSA(S-乙酰基巯基琥珀酸酐)法等。耦联后的人工抗原往往需要进一步纯化。透析是常用的方法,还可采用凝胶柱层析的方法分离。半抗原与载体蛋白的分子结合比对抗体特异性和效价有一定的关系。一般认为人工免疫抗原结合比高,可以增加免疫刺激的强度和特异性。
目前,绝大多数农药人工抗原是通过将单一农药半抗原耦联到载体蛋白分子上的方法获得的。所获得的抗原称之为单一决定簇人工抗原。王姝婷等通过对人工抗原的设计,将克百威、*磷、毒死蜱和甲基对硫磷半抗原耦联到一个载体蛋白分子上,制备出了多抗原决定簇的人工抗原,并获得了能同时识别上述4种农药的“宽谱特异性”(broadspecificity)多克隆抗体。这为农药人工抗原的制备提供了一种新的途径和策略。