研究活细胞或组织最好的方法是?
发布网友
发布时间:2022-05-13 07:37
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好二三四
时间:2022-06-18 17:33
用于观察活细胞的方法或设备是组织培养细胞法,便于直接观察活细胞,是组织培养技术的一个突出的优越性。允许实验者在细胞培养的不同阶段,进行观察和记录活细胞的变化过程。最常用的观察记录方法有:相差显微镜观察和摄像、显微摄电影和闭路电视观察和录像等。
热心网友
时间:2022-06-18 14:41
1(常用光镜标本制备技术
切片标本的制备。这是最常用的方法。应用光学显微镜观察机体各部的微细结构时,首先应把所有要观察的材料制成薄片,最基本的就是切片方法,其中石蜡切片更为常用。其制备程序大致如下:
(1)取材与固定。将所要观察的人体或动物的新鲜材料切成适当的小块,立即浸入固定液(如甲醛溶液等)中进行固定,防止离体后结构发生变化,使其尽可能保持活体时的结构状态。
(2)脱水与包埋。为了使石蜡能浸入组织内,把固定好的材料用乙醇等脱水,经二甲苯透明后,再浸入加温溶化的石蜡中浸透包埋使组织块变硬。
(3)切片与染色。将包埋的组织蜡块,用切片机切成5-10μm左右的薄片,贴在载玻片上,脱蜡后进行染色。最常用的染色法是苏木精和伊红染色,简称HE染色。
(4)封固。在切片上滴加中性树胶,用盖玻片进行封固,保存备用。
在制作较硬组织(如骨组织等)或较大组织器官(如眼球)等切片,可用火棉胶代替石蜡进行浸透包埋,再进行染色。为了较好地保存细胞内酶的活性 ,可选用冰冻切片,将组织在低温条件下快速冻结,直接切片,进行染色。
2(涂片、铺片、磨片标本的制备
血液等液体材料,可直接在玻片上涂片,干燥后再进行固定和染色。疏松结缔组织和肠系膜等薄层组织,可在玻片撕开展平,制成铺片,待干燥后进行固定和染色。骨和牙等坚硬组织除用酸(稀*等)脱钙后再按常规制成切片外,还可直接研磨成薄的磨片进行染色观察。
3(组织化学和免疫组织化学方法
组织化学与细胞化学是应用物理、化学和免疫学方法,对组织、细胞内某些化学成分的定性、定位和定量进行研究,从而探讨与其相关的机能活动。
(1)组织化学。其原理是在组织切片上或被取材料上,加某种试剂,使它与组织或细胞内某些物质起化学反应,形成最终反应产物。光镜组织化学要求其最终产物是有色的沉着物;电镜细胞化学要求其最终产物是重金属沉着物。观察其沉着物的颜色、深浅或电子密度,可对某种物质进行定性、定位和定量。
(2)免疫细胞化学。是将免疫学基本理论与细胞化学技术相结合而建立起来的新技术。主要是应用抗原与抗体特异性结合的特点,检测细胞内某些肽类和蛋白质等大分子物质的分布。肽类和蛋白质种类繁多,均具抗原性。提取动物的某些肽类和蛋白质,作为抗原注入另一种动物体内,则产生与抗原相应的特异性抗体(免疫球蛋白),从血清中制备该抗体。如使抗体与荧光素结合,则形成荧光标记抗体。常用的荧光素为异硫氰酸荧光素(FITC),当用该荧光素标记抗体处理组织切片时,则与组织内相应抗原发生特异结合,在荧光显微镜下呈黄绿色荧光部分,即为抗原抗体复合物,称此为荧光标记抗体法。如抗体与辣根过氧化物酶(HRP)等酶标记,与抗原结合后呈棕红色,可在光镜或电镜下观察,此即酶标抗体法。
4(组织培养
组织培养或细胞培养是在体外研究活组织或活细胞的形态结构和生理功能动态变化的一种很有价值的研究手段,已广泛应用于生物医学的各个领域。组织培养是在无菌条件下进行,从机体取得的活组织或活细胞,或者长期传代培养的细胞株,放入盛有营养液的培养基
热心网友
时间:2022-06-18 15:59
如果想要观察的细胞或组织是活的,电镜是一个很好的选择。当然光学显微镜也可以观察一部分的活细胞和组织,但是光学显微镜像有时有些操作需要杀死细胞和组织才能观察到的