RT-PCR是,内参是什么时候加入,作用是什么?谢谢
发布网友
发布时间：2022-05-12 21:09
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热心网友
时间：2023-10-22 21:20
你说的应该是real
time
pcr吧，注意rt其实是逆转录reverse
transcription的缩写，和real
time一定要分开来。
常说的qpcr，qrt-pcr，都是通过实时（real
time）的方法，测定样品中某个模版的起始量ct值
但是呢，由于之前rna提取、反转等步骤，各个步骤存在不同的效率，ct值并无法真实反应样品中模版的绝对量，因此，需要一个内参来做为参考。
比方说，a基因的ct值，在a样品中是18，在b样品中是20，由于a
b样品存在rna质量等等一系列不同，你无法直接就判断这个基因在a样品中的表达量是b样品的4倍。
这时候，我们需要一个内参，假如内参ct值在a样品中是14，而在b样品中是15。由于内参的稳定性，在不同样品中被认为是表达量一致的，因此，a基因的在ab样品之间的-δδct值是1，也就是表达量为2倍的关系。
这里，我们可以知道内参的作用，即通过测量内参，可以在后面分析过程中将不同样品的起始量均一化。内参需要选择在不同样品中有稳定表达量的基因，这就是为什么内参经常选择看家基因的原因。以小鼠为例，常用的内参有actin
gapdh
hprt等等。
当然，现在的很多观点认为这些基因在不同组织中丰度也不同，例如gapdh，在线粒体含量高的组织中丰度高，很多人认为用基因组dna做内参会更加靠谱，当然这是后话了，选择gapdh无碍于现阶段的实验，如果觉得不靠谱，可以选择两个内参。
你所研究的物种，应该有人已经发表过相应的内参，直接上数据库搜就可以了。
原创内容，码字不易，万望采纳。
热心网友
时间：2023-10-22 21:20
内参就是在cDNA里面的啊 比如你有三种反转录的cDNA 就分别用内参的引物做三组 和目标基因一起做就行了 不过是要单独加 不是和目标基因的引物加在一个孔里
热心网友
时间：2023-10-22 21:21
所有曲线都要在上升期的中间，不光是内参。
进入平台期，反应就饱和了，也就是说再反应下去，产量也不增加。CT值就不和原来的样本浓度有关系了。
计算可以用免费的 Image J
热心网友
时间：2023-10-22 21:21
这东西其实挺深奥的，目前我正在看着方面的东西，准备做RT-PCR，等整明白了相互交流，
RT-PCR是,内参是什么时候加入,作用是什么?谢谢
你说的应该是real time pcr吧，注意rt其实是逆转录reverse transcription的缩写，和real time一定要分开来。常说的qpcr，qrt-pcr，都是通过实时（real time）的方法，测定样品中某个模版的起始量ct值 但是呢，由于之前rna提取、反转等步骤，各个步骤存在不同的效率，ct值并无法真实反应样品中模版的绝对量...
RT-PCR的原理是什么?有何用途?
1，最常用的理解：RT 是‘逆转录’（reverse transcription）的缩写 2，现在也有人这么用：RT是‘实时’（real time）的缩写 1，先说逆转录PCR：这项技术使用的‘逆转录酶’来自逆转录病毒，是一种能按照碱基互补配对原则，以脱氧核糖核苷酸为底物，以寡居dT为引物，把mRNA转换成相应DNA的酶，由于该...
请问“内参”是什么呀?我是指生物学里的“内参”
是一段表达量比较稳定的基因 一般作为对照 就是说您在做RT-PCR事 为了去除不同标准本再RNA得产量，质量，以及逆转录效率上可能纯在的差别而获得目标基因特异性表达的真正差异，通常选择内参来进行校正和标准化。内参基因的扩增可以反映RNA产量，质量和CDNA合成效率的变化。
如何处理Real time PCR的数据结果
比方实验设置如下： 内参基因：对照组1、对照组2、对照组3 实验组1、实验组2、实验组3 目的基因：对照组1、对照组2、对照组3 实验组1、实验组2、实验组3 数据处理的时候，是先分别取内参、目的基因的三次平行实验的均值再拿相应均值相减得到 △ Ct，还是先算每组△ Ct(目的基因-内参基因）后再...
反转录RT-PCR的内参如何选择?
RT-PCR就是将RNA先反转录为cDNA，在将转录得到的cDNA作为模板进行PCR反应扩增目标片段。用于反转录的引物根据实验的具体情况选择随机引物、Oligo dT及基因特异引物的一种。对于短的不具有发卡结构的真核细胞mRNA三种都可。随机引物：适用于长的具有发卡结构的RNA。适用于rRNA、mRNA、tRNA等所有RNA的转录反应...
RT PCR为何都要跑电泳,在PCR的时候为何要加内参?是为了判断是否是PCR...
有时候溶解曲线看上去是很特异的，而电泳却能跑出两条带；加内参是为了做表达比对，跟内参比，这样才能知道是高表达还是地表达，也可以作为判断PCR反应过程是否顺利的依据。
RT-PCR,QRT-PCR,real-timePCR之间什么区别
RT-PCR：反转录PCR(reverse transcription-PCR)，是聚合酶链式反应(PCR)的一种广泛应用的变形。在RT-PCR中，一条RNA链被逆转录成为互补DNA（cDNA），再以此为模板通过PCR进行DNA扩增。QRT-PCR在RT-PCR体系中同时加入内参标基因的引物，使目的基因和内参基因在同一条件下同时扩增。在扩增反映结束之后，...
RT -PCR注意事项
内参的选择和使用是为了精确定量目标RNA。常见的内参如G3PD和β-Actin等，它们的作用在于校正RNA定量误差、加样偏差以及可能存在的PCR反应体系扩增效率不一致等影响。在实验设计时，应确保内参的稳定性和准确性。PCR过程中，避免平台效应的出现非常重要。平台效应受目标基因长度、序列、二级结构以及起始DNA量...
RT -PCR操作步骤
RT-PCR操作步骤详解:首先，从组织或细胞中提取总RNA，确保RNA的质量和量适宜。通常，提取过程会涉及使用DEPC H2O稀释RNA样本，以及Oligo(dT)12-18作为引物。接着进行cDNA的第一链合成，以长沙赢润生物技术有限公司的试剂盒为例：在0.5ml微量离心管中，加入1-5μg总RNA，加入1μl Oligo(dT)12-18，...
求RT-PCR 流程和注意事项
有关内参: RT-PCR内参照可以在一个管子里做(那样也是图好看一些),最好分开两管,把除了引物之外的mixture统一配,拍照后,算目的基因和内参的比值, 这就是基因表达的相对浓度。问:我曾经作过同一管的PCR,内有actin 和目的基因引物。虽然可见到两条均一条带但图片质量不理想(而且酶量、Mg2+加倍)。请教mxbdna2003...
