在做pcr的操作过程中需注意哪些问题?

发布网友发布时间：2022-05-12 23:30

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热心网友时间：2023-10-30 20:25

首先，在设计PCR引物时，结构要好，长度应在20bp左右，避免引物间形成引物二聚体。两条引物的退火温度尽量保持一致，最好是在55度左右。
其次，使用的DNA模板量是比较关键的，应使用纯度较高，基因组较完全，没有产生断链的基因组DNA。
然后是PCR体系中各个试剂的使用，比如说酶的纯度，活性，并且要注意酶量一定要适中，过尤不及。各DNTP的量要保持一致。PCRbuffer中要注意有无添加镁离子等帮助反应进行的东西。等等。
最后是PCR程序的设置。如果怕一开始就使用一个固定的退火温度扩增不出来，可以先小批量得试验温度梯度，或者用touchdown程序，即先设置一个较高的退火温度，这样引物的特异性结合会比较好，然后每个循环的退火温度都比上个循环低0.5度或1度，最终停留在某一个较合适的温度完成整个程序。
PCR反应中有太多细节要注意了。只能在试验中摸索，进步。
现在也有公司可以代做PCR，省时省力，大大缩短研究周期。
可以来杭州百替生物看看哦！

热心网友时间：2023-10-30 20:26

主要是退火的时间以及在pcr中的程序设置，不同的基因片段需要不同的设置哦，这个可以问问带你的老师。不然可是扩不出来的哦

热心网友时间：2023-10-30 20:26

原理：DNA双连复制
条件：已知目的基因的核苷酸序列，四种脱氧核苷酸，一对引物，DNA聚合酶
过程：DNA变性，氢键断开，成单链DNA
退火，形成局部双链
延伸
特点：成指数形式扩增